农用微生物菌剂国家标准（GB 20287-2006）

前 言

本标准的5.1、5.3 和第8 章条文为强制性条款，其余为推荐性条款。

本标准的附录A、附录C 和附录D 为规范性附录，附录B 为资料性附录。

农用微生物菌剂

1 范围 本标准规定了农用微生物菌剂（即微生物接种剂）的术语和定义、产品分类、要求、试验方法、检验规则、包装、标识、运输和贮存。

本标准适用于农用微生物菌剂类产品。

2 规范性引用文件（略）

3 术语和定义（略）

4 产品分类

产品按剂型可分为液体、粉剂、颗粒型；按内含的微生物种类或功能特性可分为根瘤菌菌剂、固氮菌菌剂、解磷类微生物菌剂、硅酸盐 微生物菌剂、光合细菌菌剂、有机物料腐熟剂、促生菌剂、菌根菌剂、生物修复菌剂等。

5 要求

5.1 菌种

生产用的微生物菌种应安全、有效。生产者应提供菌种的分类鉴定报告，包括属及种的学名、形态、生理生化特性及鉴定依据等完整 资料。生产者应提供菌种安全性评价资料。采用生物工程菌，应具有允许大面积释放的生物安全性有关批文。

5.2 产品外观（略）

5.3 产品技术指标

5.3.1 农用微生物菌剂产品的技术指标见表1，其中有机物料腐熟剂产品的技术指标按表2 执行。

表1 农用微生物菌剂产品的技术指标

a 复合菌剂，每一种有效菌的数量不得少于0.01 亿/g(mL)；以单一的胶质芽胞杆菌（Bacillus mucilaginosus）制 

成的粉剂产品中有效活菌数不少于1.2 亿/g。

b 此项仅在监督部门或仲裁双方认为有必要时检测。

表2 有机物料腐熟剂产品的技术指标

a 以农作物秸秆类为腐熟对象测定纤维素酶活。 

b 以畜禽粪便类为腐熟对象测定蛋白酶活。

c 此项仅在监督部门或仲裁双方认为有必要时检测。

5.3.2 农用微生物菌剂产品中无害化指标见表3。

表3 农用微生物菌剂产品的无害化技术指标

参数                                    标准极限

粪大肠菌群数，个/g(mL)             ≤     100

蛔虫卵死亡率，%                   ≥     95

砷及其化合物（以As 计），mg/kg     ≤     75

镉及其化合物（以Cd 计），mg/kg     ≤     10

铅及其化合物（以Pb 计），mg/kg     ≤     100

铬及其化合物（以Cr 计），mg/kg     ≤     150

汞及其化合物（以Hg 计），mg/kg     ≤     5 6

试验方法

6.1 仪器设备（略）

6.2 试剂（略）

6.3 产品参数的检测

6.3.1 外观(感官)的测定

取少量样品放到白色搪瓷盘(或白色塑料调色板)中，仔细观察样品的颜色、形状、质地。

6.3.2 有效活菌数的测定

采用平板计数法，根据所测微生物的种类选用适宜的培养基。

若采用最大可能数（Most Probable Number，MPN）5 管法，遵照附录C 的规定。

6.3.2.1 系列稀释

称取样品10 g（精确到0.01 g），加入带玻璃珠的100 mL 的无菌水中(液体菌剂取l0.0 mL 加入90 mL 的无菌水中)，静置20 min，在 旋转式摇床上200 r/min 充分振荡30 min，即成母液菌悬液（基础液）。

用无菌移液管分别吸取5.0mL 上述母液菌悬液加入45 mL 无菌水中，按1:10 进行系列稀释，分别得到1:1×10 1 ，1:1×10 2 ，1:1×10 3 ， 1:1×10 4 ……稀释的菌悬液（每个稀释度应更换无菌移液管）。

6.3.2.2 加样及培养

每个样品取3 个连续适宜的稀释度，用无菌移液管分别吸取不同稀释度菌悬液0.1 mL，加至预先制备好的固体培养基平板上，分别用无 菌玻璃刮刀将不同稀释度的菌悬液均匀地涂于琼脂表面。

每一稀释度重复3 次，同时以无菌水作空白对照，于适宜的条件下培养。

6.3.2.3 菌落识别

根据所检测菌种的技术资料，每个稀释度取不同类型的代表菌落通过涂片、染色、镜检等技术手段确认有效菌。当空白对照培养皿出现 菌落数时，检测结果无效，应重做。

6.3.2.4 菌落计数

以出现20~300 个菌落数的稀释度的平板为计数标准（丝状真菌为10~150 个菌落数），分别统计有效活菌数目和杂菌数目。当只有一 个稀释度，其平均菌落数在20～300 个之间时，则以该平均菌落数计算。若有两个稀释度，其平均菌落数均在20～300 个之间时，应按 两者菌落总数之比值决定。若其比值小于等于2 应计算两者的平均数；若大于2 则以稀释度小的菌落平均数计算。有效活菌数按式（1） 或式（2）计算：

nm = Xkv1/(m0v2) ×10 -8 …………………（1）

nv = Xkv1/(v0v2) ×10 -8 …………………（2）

式中：

nm — 质量有效活菌数， 亿/g

nv — 体积有效活菌数， 亿/mL

X— 菌落平均数， 个

k — 稀释倍数

v1 — 基础液体积，

mL v2 — 菌悬液加入量， mL

v0 — 样品量， mL

m0 — 样品量， g

6.3.3 霉菌杂菌数的测定

采用马丁培养基，测定方法同6.3.2。

6.3.4 杂菌率的测定

除样品有效菌外其它的菌均为杂菌。样品中杂菌率按式（3）计算：

m = n1/(n1+n)×100 …………………（3）

式中：

m — 样品杂菌率， %

n1